NR APVU
AU Curin Serbec,V.; Bresjanac,M.; Popovic,M.; Pretnar Hartman,K.; Galvani,V.; Rupreht,R.; Cernilec,M.; Vranac,T.; Hafner,I.; Jerala,R.
TI Monoclonal antibody against a peptide of human prion protein discriminates between Creutzfeldt-Jakob's disease-affected and normal brain tissue
QU The Journal of Biological Chemistry 2004 Jan 30; 279(5): 3694-8
PT journal article
AB Current methods for diagnosing transmissible spongiform encephalopathies rely on the degradation of the cellular prion protein (PrPc) and the subsequent detection of the protease-resistant remnant of the pathological prion isoform PrPsc by antibodies that react with all forms of PrP. We report on a monoclonal antibody, V5B2, raised against a peptide from the C-terminal part of PrP, which recognizes an epitope specific to PrPsc. In cryostat sections from Creutzfeldt-Jakob's disease (CJD) patients' brains, V5B2 selectively labels various deposits of PrPsc without any pretreatment for removal of PrPc. V5B2 does not bind to non-CJD brain samples or to recombinant PrP, either in its native or denatured form. Specificity for PrP is confirmed by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay utilizing V5B2, which discriminates between CJD and normal samples without proteinase K treatment, and by immunoprecipitation from CJD brain homogenate. The PrPsc-specific epitope is disrupted by denaturation. We conclude that the C-terminal part of PrP in disease-associated PrPsc aggregates forms a structural epitope whose conformation is distinct from that of PrPc.
IN
Die Autoren immunisierten BALB/c-Mäuse mit den folgenden vom menschlichen Prionprotein abgeleiteten Peptiden:
P1: Aminosäuren 214-226: CITQYERESQAYY,
P2: Aminosäuren 167-179: DEYSNQNNFVHDC,
P3: Aminosäuren 139-150; CIHFGSDYEDRYY.
Die Sequenz des dritten Peptids ist länger als von den Autoren angegeben. Eine Erklärung liefern sie dafür nicht. Die aufgrund der Immunisierung stark vermehrten B-Lymphozyten fusionierten sie mit Myelomzellen und testeten die von den resultierenden Hybridomzelllinien produzierten monoklonalen Antikörper. Drei Immunisierungen mit dem besonders gut funktionierenden Peptid P1 lieferten über 2000 Hybridomzelllinien, von denen 44 an P1 binden konnten. Nur 3 davon unterschieden zwischen PrPsc und PrPc. Von diesen suchten sie den monoklonalen Antikörper V5B2 aus, der selektiv natives PrPsc und nicht PrPc markiert. Denaturiertes Prionprotein und selbst aggregiertes rekombinantes Prionprotein erkennt er nicht. V5B2 markiert auf in mit Paraformaldehyd fixierten und in Paraffin eingebetteten Schnitten selektiv PrPsc. Er funktioniert nicht nur bei menschlichen Proben, sondern eignet sich auch für die Diagnose von Scrapie und BSE.
MH Animals; Antibodies, Monoclonal/*chemistry; Blotting, Western; Brain/metabolism; Creutzfeldt-Jakob Syndrome/immunology/*metabolism; Electrophoresis, Polyacrylamide Gel; Endopeptidase K/pharmacology; Enzyme-Linked Immunosorbent Assay; Epitopes/chemistry; Human; Mice; Mice, Inbred BALB C; Peptides/*chemistry; PrPc Proteins/chemistry/*physiology; Precipitin Tests; Protein Conformation; Protein Structure, Tertiary; Recombinant Proteins/chemistry/metabolism; Support, Non-U.S. Gov't
AD Vladka Curin Serbec, Mara Bresjanac, Mara Popovic, Katrina Pretnar Hartman, Vesna Galvani, Ruth Rupreht, Maja Cernilec, Tanja Vranac, Iva Hafner, and Roman Jerala; Laboratory of Biotechnology, National Institute of Chemistry, Ljubljana 1000; Blood Transfusion Center of Slovenia, Slajmerjeva 6, the Institutes of Pathophysiology and Pathology, School of Medicine, Ljubljana, Slovenia. vladka.curtin@ztm.si
SP englisch
PO USA
ZF kritische Zusammenfassung von Roland Heynkes