NR ALKL
AU Taraboulos,A.; Raeber,A.J.; Borchelt,D.R.; Serban,D.; Prusiner,S.B.
TI Synthesis and trafficking of prion proteins in cultured cells
QU Molecular Biology of the Cell 1992 Aug; 3(8): 851-63
IA http://www.pubmedcentral.nih.gov/picrender.fcgi?artid=275644&blobtype=pdf
PT journal article
AB Scrapie prions are composed largely, if not entirely, of the scrapie prion protein (PrPsc) that is encoded by a chromosomal gene. Scrapie-infected mouse neuroblastoma (ScN2a) and hamster brain (ScHaB) cells synthesize PrPsc from the normal PrP isoform (PrPc) or a precursor through a posttranslational process. In pulse-chase radiolabeling experiments, we found that presence of brefeldin A (BFA) during both the pulse and the chase periods prevented the synthesis of PrPsc. Removal of BFA after the chase permitted synthesis of PrPsc to resume. BFA also blocked the export of nascent PrPc to the cell surface but did not alter the distribution of intracellular deposits of PrPsc. Under the same conditions, BFA caused the redistribution of the Golgi marker MG160 into the endoplasmic reticulum (ER). Using monensin as an inhibitor of mid-Golgi glycosylation, we determined that PrP traverses the mid-Golgi stack before acquiring protease resistance. About 1 h after the formation of PrPsc, its N-terminus was removed by a proteolytic process that was inhibited by ammonium chloride, chloroquine, and monensin, arguing that this is a lysosomal event. These results suggest that the ER is not competent for the synthesis of PrPsc and that the synthesis of PrPsc occurs during the transit of PrP between the mid-Golgi stack and lysosomes. Presumably, the endocytic pathway features in the synthesis of PrPsc.
IN In einem pulse-chase-Markierungsexperiment mit radioaktiven Markern in Kulturen Scrapie-infizierter Mausneuroblastomzellen (ScN2a) und Hamsterhirnzellen (ScHaB) verhinderte Brefeldin A reversibel den Transport neusynthetisierter Prionproteine PrPc aus dem endoplasmatischen Retikulum an die Zelloberfläche, sowie die Bildung von PrPsc, wenn es während und auch noch nach der Markierung anwesend war. Auf die Verteilung der PrPsc-Ablagerungen innerhalb der Zellen hatte Brefeldin A keinen Einfluß. Durch Unterdrückung der Glykosylierung im mittleren Golgi-Apparat mittels Monesin ließ sich zeigen, dass die PrPsc nicht bereits im endoplasmatischen Retikulum oder im Golgi-Apparat entstehen. Rund 1 Stunde nach Bildung eines PrPsc-Moleküls scheint sein aminoterminales Ende abgespalten zu werden. Da diese Abspaltung durch Ammoniumchlorid, Chloroquin, sowie Monensin unterdrückt werden kann, scheint sie in Lysosomen zu geschehen. Die Umwandlung von PrPc in PrPsc scheint demnach auf der Zelloberfläche, in Caveolen, oder in den Endosomen zu erfolgen.
MH Animal; Antibodies; Biological Transport/drug effects; Blotting, Western; Brain/cytology; Brefeldin A; Cell Membrane/metabolism; Cells, Cultured; Cyclopentanes/pharmacology; Electrophoresis, Polyacrylamide Gel; Endoplasmic Reticulum/metabolism; Hamsters; Mannosyl-Glycoprotein Endo-beta-N-Acetylglucosaminidase/metabolism; Mice; Neuroblastoma; PrPsc Proteins; Precipitin Tests; Prions/*biosynthesis; Protein Precursors/metabolism; Scrapie/metabolism; Support, Non-U.S. Gov't; Support, U.S. Gov't, P.H.S.; Translation, Genetic; Tumor Cells, Cultured
AD Department of Neurology, University of California, San Francisco 94143.
SP englisch
PO USA
ZF grobe Zusammenfassung von Roland Heynkes